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组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP）测试盒,科惟生物
中文名称：组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP）测试盒产品规格 ：50管/24样 产品品牌：科惟生物 交 货 期：现货 |
组织及血液碱性磷酸酶（alkaline phosphatase ，AKP/ALP） 活性测定试剂盒说明书 可见分光光度法（也有微量法的） 注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。 测定原理： 在碱性环境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与 4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510 nm 吸光度增加速率，来计算AKP 活性。 自备仪器和用品： 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1 瓶，4℃避光保存。 试剂三：液体×1 瓶，4℃避光保存。 试剂四：液体×1 瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。 标准品：液体×1 支（EP 管中），2 μ mol/mL 酚标准液，4℃保存。 粗酶液提取： 1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g 离心 10min，取上清液待测。 2. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。 测定步骤： 1. 分光光度计预热30min，调节波长到510nm，蒸馏水调零。 2. 试剂三置于37℃水浴中预热30min。 3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸馏水，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A空白管。 4. 标准管：取EP管，加入20μL标准品，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm 测定吸光度，记为A标准管。 5. 对照管：取EP管，加入200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀；最后加入20μL上清液，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A对照管。 6. 测定管：取EP管，加入20μL上清液，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于 37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm 测定吸光度，记为A测定管。 注意：空白管和标准管只需测定一次。
AKP/ALP 活性计算： 1. 组织中 AKP/ALP 活性计算 （1）按照蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1μmol 酚定义为1个酶活单位。 AKP/ALP(μmol/min/mg prot)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(Cpr×V 样)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr （2）按照样本质量计算 活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1μmol 酚定义为1个酶活单位。 AKP/ALP(μmol/min/g)=[C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反 总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W C 标准品：2μmol/mL；V 反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02 mL； Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司生产的 BCA 蛋白质含量测定试剂盒； V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W:样本质量，g；T：反应时间（min），15 min。 2. 血液中 AKP/ALP 活力计算 活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚定义为 1 个酶活单位。 AKP/ALP 活力(μmol/min /mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总] ÷V 样×V 样总÷T=6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) C 标准品：2μmol/mL；V 反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02 mL； V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间（min）， 15 min。 注意事项： 1.试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。 2.试剂四变蓝绿色后不能再使用。 3.加入试剂四后必须立即混匀，否则显色不完全。 |
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