BL21(DE3)感受态细胞,科惟生物

中文名称：BL21(DE3)感受态细胞 产品货号：KW-96107 产品规格 ：10*100μL 产品品牌：科惟生物 交 货  期：现货 BL21(DE3)化学感受态      产品简介 BL21(DE3)  感受态细胞适用于无毒异源基因的表达 。该菌株含有受 lacUV5 启动子控制的 T7 RNA 聚 合酶基因(λDE3)，可实现 IPTG 诱导的 T7 RNA 聚合酶表达。BL21(DE3)是一种大肠杆菌 B 菌株，不含 lon 蛋白酶 。其也缺乏外膜蛋白酶 OmpT 。不存在这两种关键蛋白酶可降低细胞中表达的异源蛋白的降解 。转 化效率超过 107 cfu/μg DNA， 可以用于 pET 等系列质粒的蛋白高效表达。  产品组成   组分 KW-96107 BL21(DE3)化学感受态 10 × 100 μL 基因型： F- ompT hsdSB  (rB- mB-) galdcm (DE3)  存储条件 -80℃保存； 请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存!  使用方法 1.  解冻感受态细胞：从-80 ℃取感受态细胞,  放置在冰浴或冰水浴中融化,约 5- 10 min,  放置时间 过长会影响转化效率。 2.  DNA 样品的转化:  每 100 μL 感受态加入待转化 DNA 样品(例如质粒、连接产物或重组产物等) 约 10 μL ，然后轻轻弹击管底约 2-3 次，立即冰上静置孵育 30 min。   加入待转化 DNA 样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的 10%。   加入待转化 DNA 样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。   如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约 10 min 后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产 物或重组产物的转化，建议冰浴静置 30 分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤， 以提高转化效率。 3.  热激处理：将冰浴后的离心管快速置于 42℃水浴中，静置热激 90 s 。随后立即转移至冰水浴 中静置 2-3 min 以快速冷却。   热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。 4.  复苏培养：加入 900 μL 37 ℃预热的 LB 或 SOC 培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约 220 rpm 复苏培养 45 min。 5.  收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取 50- 100 μL 进行涂板即可；如果用于连接产 物或重组产物的转化，建议先 5000 g ，1 min 室温离心沉淀细菌，吸除约 900-950 μL 上清，然后用剩余的约 50- 100 μL 菌液重悬，涂布到含相应抗生素的 LB 平板上。 6.  过夜培养：将平板倒置放于 37℃培养箱培养过夜。 u  培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。  注意事项 1.  感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用； 2.  加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/ 10； 3.  加入待转化 DNA 后， 不要用移液器吹吸感受态细胞， 仅用手指轻弹即可； 4.  为确保更高转化效率， 整个操作过程中除热激外均要保持低温， 并且要尽量轻柔。

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